? ??樣本采集前必須制定完整的計劃，其中應包含采樣方法、采樣量、保存方法等，并充分考慮待測成分的穩定性。對于當天檢測的樣本，應使用無菌器材采集，并立即置于4℃保存，并在8小時內完成檢測。對于需要第二天再次檢測的樣本，應使用無菌器材采集后立即分裝成一次檢測的用量，并置于-20℃凍存備用，以避免反復凍融。如有長期保存需求，建議-70℃或-80℃凍存。對于特殊樣本，例如血液或組織樣本，需要根據具體待測成分采取相應的特殊處理措施，例如添加抗凝劑或蛋白酶抑制劑等。所有樣本均應避免反復凍融。

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????可用于ELISA實驗的樣本種類很多，包括：血清、血漿、細胞上清、細胞裂解液、尿液、滑液、腦脊液、肺泡灌洗液、以及各種組織的組織勻漿。這里主要介紹血清、血漿、細胞上清、尿液、細胞裂解液、以及各種組織的組織勻漿的樣本制備。

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????血清

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????將采集的全血置于室溫（18-25℃）下靜置30-60分鐘，或直至觀察到血塊完全形成。然后將血液樣本在4℃下以1000-2000g的相對離心力離心10分鐘。小心地使用移液器吸取上清液（血清），避免觸碰血塊或產生氣泡，并將血清轉移至干凈的試管中。若保存過程中有沉淀形成，則再次以相同的條件離心。根據檢測需求，將血清短期保存在4℃或長期保存在-20℃或-80℃（推薦）凍存。

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????等離子體

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????根據檢測指標選擇合適的抗凝劑（EDTA、檸檬酸鈉或肝素），輕輕顛倒混勻血液數次。然后，將血液樣本在室溫或4℃（推薦用于不穩定指標）下，以1500-2000g的相對離心力離心10-15分鐘。小心地使用移液器吸取上清液（血漿），避免觸碰下層細胞，并將血漿轉移至干凈的試管中。若保存過程中有沉淀形成，則再次以相同條件離心。根據待測指標的穩定性，將血漿短期保存在4℃或長期保存在-20℃或-80℃（更推薦）凍存。并記錄保存時間，避免樣本過期失效。

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????尿

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????收集指定時間段的尿液（例如晨尿、隨機尿或24小時尿）于無菌試管中。將尿液樣本在室溫或4℃下以1500-2000g的相對離心力離心10-15分鐘，以去除細胞和雜質。小心地使用移液器吸取上清液，轉移至干凈的試管中。若保存過程中有沉淀形成，則再次以相同條件離心。根據檢測需求，將尿液短期保存在4℃或長期保存在-20℃或-80℃凍存。

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????細胞培養上清液

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????收集細胞培養上清液到無菌離心管中。在4℃下以1000-2000g的相對離心力離心10分鐘，以去除細胞和較大碎片。使用移液器小心地吸取上清液，避免擾動沉淀，轉移至新的無菌離心管中。對于某些對細胞碎片敏感的實驗，建議在此基礎上再進行一次10000g、4℃離心10分鐘。根據待測分泌成分的特性，考慮添加蛋白酶抑制劑或其他保護劑。將處理后的上清液短期保存在4℃或根據需要分裝后長期保存在-20℃或-80℃凍存，并注意避免反復凍融。在進行后續檢測時，應考慮細胞培養基本身的成分對實驗結果的潛在影響，并設置適當的對照組。

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????細胞裂解物

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????將細胞懸液用不含鈣鎂離子的PBS(pH7.2-7.4)稀釋至合適的細胞濃度（例如1x10^7/ml）。在冰上加入適量的組織蛋白提取試劑，輕輕混勻，裂解30分鐘。然后在4℃下以12000g的相對離心力離心15分鐘，以去除細胞碎片和未裂解的細胞。使用移液器小心地吸取上清液，避免擾動沉淀，轉移至新的離心管中。對于蛋白檢測實驗，裂解液中需添加蛋白酶抑制劑。若保存過程中有沉淀形成，則再次以相同條件離心。根據待測胞內成分的特性，選擇合適的保存溫度和方法，例如短期保存在4℃，長期保存在-20℃或-80℃。

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????組織樣本

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????將新鮮組織標本切成小塊(約1-2mm3)，每克組織塊加入5-10倍體積的預冷PBS(pH7.4)或其他合適的裂解液（例如RIPAbuffer，并添加蛋白酶抑制劑）。將組織塊和裂解液置于凍存管中，浸入異戊烷中，然后緩慢放入液氮中進行冷凍保存。解凍時，將凍存管置于37℃水浴中快速搖晃解凍，然后立即置于冰上。使用合適的方法進行勻漿，例如手工研磨、勻漿器或高速勻漿機。先低速離心（例如1000g，5分鐘，4℃）去除未勻漿的組織塊和細胞碎片，然后高速離心（例如12000g，15分鐘，4℃）收集上清液。將上清液分裝，一部分用于立即檢測，其余部分凍存于-80℃備用，避免反復凍融。